Določanje koncentracije kloridnih ionov v serumu s pomočjo umeritvene krivulje

PRINCIP

Kloridni ioni iz živosrebrovega tiocianata izpodrinejo tiocianatne ione. Tiocianatni ioni se vežejo z Fe³⁺ ioni v rdeče obarvan železov tiocianat.

2 Cl^– + Hg(SCN)₂ → HgCl₂ + 2 SCN^–

3 SCN^– + Fe³⁺ → Fe(SCN)₃

REAGENTI IN OPREMA

železov(III) nitrat, 20 mmol/L
živosrebrov(II) klorid, 0,8 mmol/L
živosrebrov(II) tiocianat, 2 mmol/L
dušikova (V) kislina, 45 mmol/L
vzorec seruma: kontrolni serum za biokemijo, naročilo pri Sanolabor, proizvajalec Randox
osnovna raztopina natrijevega klorida, 120 mmol/L
spektrometer Spektra^TM
blistri
reagenčne steklenice

Delovni reagent pripravimo po navodilih proizvajalca: naročilo pri podjetju IRIS d.o.o., proizvajalec DIALAB.

NEVARNOSTI

	železov(III) nitrat: lahko okrepi požar, oksidativna snov, povzroča draženje kože, povzroča hudo draženje oči R: 8, 36/38 S: 26

	živosrebrov(II) klorid: sum povzročitve genetskih okvar, sum škodljivosti za plodnost, smrtno pri zaužitju, škoduje organom pri dolgotrajni ali ponavljajoči se izpostavljenosti, povzroča hude opekline kože in poškodbe oči, zelo strupeno za vodne organizme, zelo strupeno za vodne organizme z dolgotrajnimi učinki R: 28, 34, 48/24/25, 50/53,62, 68 S: 26, 36/37/39, 45, 60, 61



	živosrebrov(II) tiocianat: smrtno pri vdihavanju, smrtno v stiku s kožo, smrtno pri zaužitju, lahko škoduje organom pri dolgotrajni ali ponavljajoči se izpostavljenosti, zelo strupeno za vpdne organizme, zelo strupeno za vodne organizme z dolgotrajnimi učinki R: 26/27/28, 32, 33, 50/53 S: 13, 28, 45, 60, 61


	dušikova (V) kislina: lahko okrepi požar, oksidativna snov, povzroča hude opekline kože in poškodbe oči, lahko je jedko za kovine R: 35 S: 23, 26, 36/37/39, 45

POSTOPEK

Koncentracija osnovne raztopine kloridov je 120 mmol/l, ker je metoda linearna le do 130 mmol/L. Raztopine od 2 do 7 pripravimo v 50 mL merilnih bučkah s pomočjo izračuna:

c₁ · V₁ = c₂ · V₂

V₁ = (c₂ · V₂) / c₁

V₁ - volumen osnovne raztopine
V₂ - volumen raztopine, ki jo pripravljamo
c₁- množinska koncentracija osnovne raztopine
c₂ - množinska koncentracija raztopine, ki jo pripravljamo

Sledimo postopku, ki je povzet v preglednici. V blister s pomočjo reagenčnih steklenic odmerimo ustrezno število kapljic. Premešamo in po 10 minutah izmerimo transmitanco pri 480 nm oz. uporabimo modro svetlobo.Transmitanco slepe nastavimo na 100,0. Nato izračunamo absorbanco za vse primere.

	slepi vzorec	razt.1	razt.2	razt.3	razt.4	razt.5	razt.6	razt.7	vzorec
Koncentracija Cl^– (mmol/L)	/	120	100	80	60	40	20	10	?
Prečiščena voda (št. kapljic)	1	/	/	/	/	/	/	/	/
Raztopina Cl^–(št. kapljic)	/	1	1	1	1	1	1	1	1
Delovni reagent (št. kapljic)	11	11	11	11	11	11	11	11	11

S pomočjo razredčenih osnovnih raztopin narišemo umeritveno krivuljo, ki prikazuje naraščanje absorbance v odvisnosti od naraščanja koncentracije kloridnih ionov, izmerimo še transmitanco neznanega vzorca in izračunamo absorbanco. S pomočjo umeritvene krivulje odčitamo koncentracijo.

Meritve

	slepi vzorec	razt.1	razt.2	razt.3	razt.4	razt.5	razt.6	razt.7	vzorec
Koncentracija Cl^– (mmol/L)	/	120	100	80	60	40	20	10	?
Izmerjena transmitanca (%)
Izračunana absorbanca

REZULTATI DIJAKOV

Meritve dijakov:

	slepi vzorec	razt.1	razt.2	razt.3	razt.4	razt.5	razt.6	razt.7	vzorec
Koncentracija Cl^– (mmol/L)	/	120	100	80	60	40	20	10	?
Izmerjena transmitanca (%)	100	65,8	66,8	72,1	80,5	89,5	94,4	96,8	70,6
Izračunana absorbanca	0	0,18	0,17	0,14	0,09	0,05	0,02	0,01	0,15

Umeritvena krivulja: Odvisnost absorbance od množinske koncentracije v mmol/L

Komentar: točke na premici so bile izračunane s pomočjo funkcije LINEST (linearna regresija)

Rezultat:
Koncentracije neznanega vzorca seruma iz umeritvene krivulje je 95 mmol/L. Pravo vrednost je podal proizvajalec kontrolnega seruma in je 98,7 mmol/L.

Pripravila: Sabina Povhe Lenart, Srednja šola za farmacijo, kozmetiko in zdravstvo, Ljubljana